PCR实验室又称基因扩增实验室。是一种分子生物学技术,可用于放大特定的DNA片段,可看成生物体外的特殊DNA复制。通过DNA基因追踪系统,能够迅速掌握患者体内的病毒含量,其精准度高达纳米级别,精确检测乙肝病毒在患者体内存在的数量、是否复制、是否传染、传染性有多强、是否要服药、肝功能有否异常改变能及时判断病人最适合使用哪类抗病毒药物、判断药物疗效如何、为提供了可靠的检验依据。大量用于疾病的诊断和任何有DNA,RNA的地方,又称无细胞分子克隆或特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增技术。下面博泰小编带您了解PCR实验室设计中有哪些细节是不可忽略的相关信息:
一、PCR实验室设计不可忽视的细节
1.设计时需要按功能间来建设,试剂配置/存储区、样品的处理区、核酸的扩增区、还有就是产品分析区,每个区都分开来操作,区与区之间物品的传递通过传递窗,进行杀菌处理,而人每去到一个区,都需要经过缓冲间,风淋室吹淋后,方可通过。
2.在整个实验的过程中,试剂和样品很容易受到气溶胶的污染,所以每个区需要规划一个缓冲间,通过气压的调节,使气溶胶不易泄露到另一个功能间,以确保实验室的安全性。
3.实验室区域的设计流程,进入需要在洁净区更换洁净服,进入缓冲室,再到污染实验区,离开时,污染实验区需要在缓冲室到沐浴间,后再到清洁区,以防止交叉污染。
4.PCR实验过程中,从试剂的准备到样品的处理,核酸的扩增还有样品的分析,在此过程中,如果有需要粉碎的,则应增加样品粉碎。
5.防止样品之间的交叉污染,设计时功能间需要净化控制,常见为10万级,缓冲间设计为正压区,以确保与外面隔离,也防止相邻房间的气溶胶进入样品间对其进行污染。
6.通风系统需要调整换气的次数、排风与送风形式、房间压差、控制系统。
7.自控系统主要的功能是调节与控制,如果没有完善的自控系统,那么很难应对突发情况,也无法确保压力梯度在合理的范围内。
8.备用电源是不可少的,以便应对突然断电的问题,此外,还要重视排风机的备用问题,以确保正负压在合理的范围内。
二、PCR实验室压差的设计
1.洁净室内设计成负压,通过控制后,使得实验过程中的试剂和样品免受气溶胶的污染,也可以降低核酸扩增物对人员和环境的污染。
2.实验室与非洁净区之间则应保持正压>10Pa,气流的方向是准备区空气流向闸间,标本制备区流向闸间,而扩增区气流方向由闸间流向扩增区。
3.按照试剂单向流方向,各个实验室之间设计不同压力梯度来实现单向气流组织方向,由试剂准备区(+20Pa)、标本制备区(+15Pa)、扩增反应一区(-5Pa)、纯化区(-10Pa)、扩增反应二区(-20Pa)、到后纯化区(-25Pa)压力逐渐降低,形成单向负压压力梯度。
三、PCR实验室安全设施
1.洁净室的空调系统,采用直流系统不回风,防止交叉污染。
2.试剂准备间设有超净工作台,免受空气环境污染;标本制备间配有生物安全柜,确保标本不污染室内环境。
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